产品简介：

乐业研发的Amplex Red胆固醇与胆固醇酯检测试剂盒(Amplex Red Cholesterol and Cholesteryl Ester Assay Kit)是一种 基于探针Amplex Red，利用荧光或吸光度检测，快速、高灵敏地对血清、血浆、组织或细胞样品、尿液、细胞培养上清等样品中游离胆固醇、总胆固醇和胆固醇酯含量进行检测的试剂盒。通常0.5-5μl血清或血浆样品就足够用于本试剂盒的荧光法检测。

本试剂盒检测灵敏度高，线性范围宽，样品用量少。本试剂盒采用吸光度检测时，在5-500μM浓度范围内有良好的线性关系；采用荧光检测时，在0.5-50μM浓度范围内有良好的线性关系。使用本试剂盒进行荧光法检测时，检测灵敏度会显著提高，可以使用更少量的样品。

本试剂盒检测方法灵活，检测速度快，适用范围广。本试剂盒不仅可以用荧光检测，也可以用吸光度检测，荧光检测比吸光度检测灵敏度约高10倍。整个检测过程约30分钟即可完成。本试剂盒可用于小鼠、大鼠、人等的血清、血浆、尿液、细胞培养上清以及组织或细胞样品的检测。本试剂盒不仅适合少量样本的检测，也非常适合高通量筛选(High-throughput screening)的自动化操作系统。

胆固醇(Cholesterol)，又称胆甾醇，是一种环戊烷多氢菲的衍生物，分子式为C₂₇H₄₆O，分子量为386.6535。胆固醇广泛存在于动物体内，尤以脑及神经组织中最为丰富，在肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也比较高。胆固醇的溶解性与脂肪类似，不溶于水，易溶于乙醚、氯仿等有机溶剂。胆固醇在血液中存在于脂蛋白中，其存在形式包括高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)。在血液中存在的胆固醇绝大多数都是和脂肪酸结合的胆固醇酯 (Cholesteryl ester)，仅有少量的胆固醇是以游离状态存在的。

胆固醇是动物组织细胞不可缺少的重要物质，它不仅是哺乳动物细胞膜的重要组成部分，同时也是合成胆汁酸，维生素D以及甾体激素的重要原料。胆固醇广泛参与胞内转运、细胞信号转导等细胞功能，并维持着膜结构的流动性。在正常情况下，机体在肝脏中合成或从食物中摄取的胆固醇，转化为甾体激素或成为细胞膜的组分，并使血液中胆固醇的浓度保持相对稳定。当肝脏发生严重病变时，血液胆固醇浓度会降低。而在黄疸性梗阻和肾病综合征患者体内，血液胆固醇浓度往往会升高。高密度脂蛋白有助于清除细胞中的胆固醇，而低密度脂蛋白超标一般被认为是心血管疾病的前兆。由于血液总胆固醇含量的升高与动脉粥样硬化、心血管疾病存在一定的关联性。所以对血液中胆固醇含量进行检测具有重要的临床意义。

本试剂盒中的Amplex Red是一种对H₂O₂高度敏感的荧光探针。在辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase, HRP)存在的情况 下，Amplex Red能与H₂O₂ 1:1反应，产生强烈的红色荧光物质试卤灵(Resorufin)。试卤灵的最大激发波长为571nm，最大发射波长为585nm，并且在激发波长处有很强的可见光吸收。因此本试剂盒可以用荧光和吸光度两种方法来进行检测。

本试剂盒的检测原理如图1所示。胆固醇酯(Cholesteryl ester)首先在胆固醇酯酶(Cholesterol esterase)的催化作用下水解生成游离胆固醇(Free cholesterol)和脂肪酸(Fatty acids, FA)，游离胆固醇进一步在胆固醇氧化酶(Cholesterol oxidase, Cho)的作用下和氧气发生氧化反应生成H₂O₂和胆甾烯酮(Cholestenone) ，再通过检测H₂O₂与Amplex Red的反应产物试卤灵的荧光强度或吸光度来最终检测总胆固醇的含量。试卤灵的荧光强度和吸光度与胆固醇的含量成正比。如果检测时不使用胆固醇酯酶，那么检测出来的就是游离胆固醇的含量。测定出总胆固醇和游离胆固醇的含量，二者相减就可以计算出胆固醇酯的含量。

本试剂盒提供了便捷的检测裂解液。对于细胞或组织样品的制备，可以用本试剂盒提供的Buffer A for Metabolic Assay，也可以用异丙醇、甲醇/氯仿(1:2, v/v)等有机溶剂。经测试发现，本试剂盒提供的检测裂解液所制备样品的检测效果与异丙醇或甲醇/氯仿(1:2, v/v)所制备的样品的检测效果相当。使用异丙醇制备的细胞或组织样品，还可以用于甘油三酯、甘油和游离脂肪酸的检测，因此优先推荐使用异丙醇。如果样品仅用于检测胆固醇、胆固醇酯和游离脂肪酸的检测，不用于甘油三脂和甘油的检测，优先推荐使用Buffer A for Metabolic Assay。如果使用异丙醇或者甲醇/氯仿(1:2, v/v)所制备的样品，样品最终用异丙醇溶解后，样品检测时如果异丙醇的体积不超过整个检测体系的10% (即100μl检测体系中不超过10μl)，不会对吸光度或荧光检测产生显著影响。

本试剂盒提供的检测裂解液有一定的通用性。使用本试剂盒中的Buffer A for Metabolic Assay裂解获得的细胞或组织样品，也可以用于乐业生产的其它代谢类试剂盒中同样使用Buffer A for Metabolic Assay进行裂解的样品检测，通用性强；而且还可用于检测蛋白浓度、进行SDS-PAGE或一些较易溶解蛋白的Western检测。

按照使用说明操作，本试剂盒小包装可以进行100次检测，中包装可以进行500次检测。